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PER002Pfu DNA聚合酶(10×Pfu Buffer )

鼎国

英文名: Pfu DNA Polymerase
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一、产品简介:
Pfu DNA 聚合酶来源于高温嗜热菌 Pyrococcus furiosus ,分子量约 90KD.本产品是从克隆有 Pfu DNA聚合酶基因的大肠杆菌纯化而来,具有 5'→3'聚合酶活性及 3'→5'外切酶活性(校正酶活性)。Pfu DNA Polymerase 是公认的目前已发现的热稳定性聚合酶中出错率最低的,因此 Pfu DNA Polymerase 适用于对保真性要求较高的 DNA 片段的 PCR 扩增。Pfu DNA Polymerase 扩增所得产物为平末端,需要在其末端加 A 后才能进行 T/A 克隆。 经检测无外源核酸酶活性;SDS-PAGE 检测纯度高于 95%;PCR 检测无外源 DNA 残留;以λDNA 为模板,可有效扩增 3 kb 以下的 DNA 片段,以人 DNA 为模板,成功扩增出 1.8 kb DNA 片段。
二、单位定义:
1单位 Taq DNA 聚合酶定义为在 72℃,30 分钟内将 10nmol 同位素标记的全核苷酸掺入到 DE81 脂不溶物质中所需的酶量。
三、应用范围:
1.常规 PCR 扩增 2.基因的高保真扩增,克隆及表达 3.基因的定点突变
四、酶储存缓冲液:
50 mM Tris-HCl(pH 8.3)         100 mM KCl         1 mM DTT         0.1 mM EDTA    Stabilizers         50% glycerol
五、10× Pfu PCR  Buffer 
200mM Tris-HCl (pH 8.8)          100 mM KCl       100mM (NH4)2SO4        20mg SO4        1% Triton X-100         1mg/ml BSA
• 10× Pfu PCR Buffer分为含Mg2+和不含Mg2+两种,不含Mg2+的buffer,配有20mM的MgCl2
• 另有不含Triton X-100 的 10×Pfu PCR buffer (DF Free)可供选择,可根据实验需要选用
六、注意事项:

  •  Pfu 具有3'→5'外切酶活性,所以扩增延伸速度远比 Taq 酶低,应根据扩增产物的长短设置相应的延伸时间,一般情况下 Pfu 酶的延伸速度为 0.5~1 Kb/min。
  •  Pfu 的3'→5'外切酶活性可能讲解引物,应先加 dNTPs 后,再加酶到反应体系中,并立即进行反应。

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