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GV-CT-DNA植物基因组DNA提取试剂盒(CTAB法)

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Cat #:GV-CT-DNA-50/ GV-CT-DNA-100
一、试剂盒组成、储存、稳定性

成分
50 T
100T 注意事项
Buffer GA1
45ml 
90ml (1)试剂中有巯基乙醇,有稍微
的刺激性气味属正常 。
(2)-20℃保存.

Buffer GA2
50ml 
100ml
Buffer GA3 
2ml 
4ml
Buffer GA4
500μl
1ml 
2ml 离心管
50 个×2
50 个×4
Handbook
1 1

二、自备试剂
氯仿、异戊醇、乙醇、灭菌双蒸水
三、操作步骤
1. 取植物新鲜组织 50mg 或者干粉样品 30mg,加入液氮充分研磨成粉末状。样品量不应超过 50mg(干
粉样品 30mg),过多的样品使得裂解不充分,最终会导致基因组 DNA 提取量减少且纯度低。
2. 将粉末放到装有 800ul Buffer GA1 的 2ml 离心管,60℃预热 30min。
3. 其间混匀 2~3 次,取出样品于室温放置。(如需消化 RNA,可在此步骤加入 Buffer GA4 ,室温放置 10min)
4. 待样品冷却到室温,加入 800ul 氯仿:异戊醇(24:1)。
5. 振荡混匀,12000rpm 离心 15min。
6. 取上清到一新离心管中加入 1.5 倍体积 Buffer GA2(1ml 左右)。
7. 放置 20—30min,12000rpm 离心 15min,轻轻去掉上清。
8. 将沉淀晾干溶于 200ul TE-buffer 或灭菌双蒸水(溶解)。
9. 加入 400ul 无水乙醇,20ul Buffer GA3,-20℃沉淀 1h。
10.4℃12000rpm 离心 15min,轻轻去掉上清。
11.500ul 75%乙醇洗,12000rpm 离心 10min,轻轻去掉上清。
12.加入 30-50ul TE buffer 或灭菌双蒸水溶 DNA。
13.琼脂糖电泳检测(用 0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,电泳缓冲液 0.5×TBE)。


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